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その他ツール

α-シヌクレイン 凝集アッセイキット
α-Synuclein Aggregation Assay Kit

α-Synucleinの凝集体形成を細胞内で再現
α-シヌクレイン凝集アッセイキットは、α-シヌクレインの凝集体形成を細胞内で再現するモデルであり、in vitro における有効成分のスクリーニングが可能です。
※本製品は 東京都医学総合研究所 認知症・高次脳機能研究分野 長谷川 成人 先生、野中 隆 先生からのライセンス品です。

背景
認知症とは記憶や判断力に障害が起こる病気で、高齢者人口が急速に増加している我が国では認知症予備軍を含めおよそ 800 万人の方々が苦しめられています。しかしながら、いまだに根本的な治療法は見つかっていません。長年の研究により、認知症を含む多くの神経変性疾患では、脳などの変性部位にある種のタンパク質から成る固まり(凝集体)が認められ、凝集体の出現が病気の発症や進行と密接に関係していることが分かってきました。

凝集体とは、正常なタンパク質が何かのきっかけで異常な構造になり細胞内で蓄積したものです。また病気毎に蓄積するタンパク質も異なります。パーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症の患者脳では、α-シヌクレインというタンパク質が細胞内で構造変化を起こし、凝集体を形成することが知られています。

コード 品名 容量 保存
温度
価格
SYN01 α-シヌクレイン
凝集アッセイキット
pCMV-SNCA(α-シヌクレイン発現プラスミドベクター、赤キャップ) 32 μL(濃度: 1.25 μg/μL)
× 1本
4℃
(禁凍結)
¥92,000
pCMV-NC(ネガティブコントロールベクター、緑キャップ) 5 μL(濃度: 1.25 μg/μL)
× 1 本
pCMV-dGFP(dGFP 発現プラスミドベクター、青キャップ) 5 μL(濃度: 1.25 μg/μL)
× 1 本
20 mM Tris-HCl Buffer(pH7.4) 10 mL × 1 本
F-αSyn(α-シヌクレイン線維化タンパク質、黄キャップ) 32 μL(濃度: 1 μg/μL)
× 1 本
MultiFectam(遺伝子導入試薬) 0.33 mg × 1 本

ご準備いただくもの(その他必要なもの)

  • アッセイ用細胞株(推奨: SH-SY5Y)
  • 培養用培地(推奨: DE/F-12、10% FBS、1% NEAA)
  • Opti-MEM® または 無血清培地(サーモフィッシャーサイエンティフィック: 31985062 等をご用意ください)
  • 滅菌済み精製水(DNase, RNase フリー)

シヌクレイン凝集体の検出実験例


図1 ウェスタンブロット法によるシヌクレイン凝集体の検出実験例
A. pCMV-NC(ネガティブコントロールベクター)
B. pCMV-SNCA(α-シヌクレイン発現プラスミドベクター)
C. pCMV-SNCA + F-αSyn(α-シヌクレイン導入)

アミロイド構造蛍光染色キットを用いた検出

アミロイド構造蛍光染色キット(コスモ・バイオ: 品番SYN02)を用いて、凝集沈着したα-シヌクレインおよび核の2重染色が可能です。

コード 品名 容量 保存温度 価格
SYN02 アミロイド構造蛍光染色キット アミロイド構造蛍光染色液 100 μL × 1本 4℃ ¥60,000
核染色液 100 μL × 1本
蛍光増強剤 5 g × 1本
コード 品名 容量 保存温度 価格
SYN03 α-シヌクレイン線維化タンパク質、ヒト型 容量(濃度) 0.1mg(1mg/mL) -80℃ ¥100,000
純度 95%以上(逆相HPLCにより検定)
懸濁溶媒 生理食塩水(0.1% NaN3)
SYN04 ヒトα-シヌクレインタンパク質、
リコンビナント、0.1mg
容量(濃度) 0.1mg(1mg/mL) -20℃ ¥30,000
純度 95%以上(逆相HPLCにより検定)
懸濁溶媒 30 mM Tris-HCl buffer(pH7.5)
SYN04 ヒトα-シヌクレインタンパク質、
リコンビナント、1mg
容量(濃度) 1mg(1mg/mL) -20℃ ¥90,000
純度 95%以上(逆相HPLCにより検定)
懸濁溶媒 30 mM Tris-HCl buffer(pH7.5)
SYN05 α-シヌクレイン線維化タンパク質、マウス型 容量(濃度) 0.1mg(1mg/mL) -80℃ ¥100,000
純度 95%以上(逆相HPLCにより検定)
懸濁溶媒 生理食塩水(0.1% NaN3)
SYN06 マウスα-シヌクレインタンパク質、
リコンビナント、0.1mg
容量(濃度) 0.1mg(1mg/mL) -20℃ ¥30,000
純度 95%以上(逆相HPLCにより検定)
懸濁溶媒 30 mM Tris-HCl buffer(pH7.5)
SYN06 マウスα-シヌクレインタンパク質、
リコンビナント、1mg
容量(濃度) 1mg(1mg/mL) -20℃ ¥90,000
純度 95%以上(逆相HPLCにより検定)
懸濁溶媒 30 mM Tris-HCl buffer(pH7.5)

参考文献

  1. J Biol Chem. 2010 Nov 5;285(45):34885-98. doi: 10.1074/jbc.M110.148460. Epub 2010 Aug 30. Seeded aggregation and toxicity of {alpha}-synuclein and tau: cellular models of neurodegenerative diseases. Nonaka T, Watanabe ST, Iwatsubo T, Hasegawa M. PMID : 20805224.
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