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その他ツール

ムチン膜電気泳動キット
Mucin Membrane Electrophoresis Kit

疾患バイオマーカー探索やムチンをターゲットとした研究に
分子マトリクス電気泳動法(Supported Molecular Matrix Electrophoresis = SMME)でムチンを簡単に分離することができます。泳動後の親水性ポリマーコーティングPVDF 膜からバンドを切り取り、糖鎖解析を行うことも可能です。
※ 本製品は、国立研究開発法人産業技術総合研究所の研究成果を活用しています(特許第5152862 号)。

背景
ムチンは上皮細胞などが産生する高粘性の糖タンパク質群であり、その糖鎖構造の変化は古くから腫瘍との関連性が報告 されてきました。しかしながら、ムチンは数MDa にも及ぶ巨大タンパク質であり、また、その50 〜 80% を占める糖鎖が プロテアーゼ分解を阻むため、プロテオミクスではなかなか分析できません。 本キットが採用する分子マトリクス電気泳動法(Supported Molecular Matrix Electrophoresis = SMME)は、多孔性ポリマー 膜に含浸させた親水性ポリマーを分離担体とする膜電気泳動であり、セルロースアセテート(セ・ア)膜電気泳動に類似し た方法です。セ・ア膜電気泳動と違い化学的に極めて安定で疎水結合力の強い PVDF を用いているため、化学的糖鎖遊離処 理において糖鎖分析を妨害する物質(セルロース由来のグルコース断片など)を生じないことや、泳動後の膜上に存在する タンパク質を別の膜に転写することなく抗体やレクチン等で染色することが可能であることが特徴です。

本キットを用いて、疾患バイオマーカー探索やムチンをターゲットとした研究が可能です。

コード 品名 容量 保存温度 価格
SMME-01 ムチン膜電気泳動キット 親水性ポリマーコーティングPVDF 膜(8.0cm x 8.5 cm) 10 枚 4℃
(禁凍結)
¥80,000
ろ紙(8.0cm x 8.5 cm) 20 枚
泳動用バッファー 500 mL × 1 本
電気泳動マーカー 0.5 mL × 1 本
酢酸Na バッファー 200 mL × 1 本
アルシアンブルー染色原液 50 mL × 1 本
データシートはこちら
ご準備いただくもの(その他必要なもの)
  • 膜電気泳動槽セット( 品番:SMME-02)
  • パワーサプライ(1 〜 10 mA 定電流運転時、100 〜 135V で稼働可能なもの)
  • メタノール
  • 酢酸、 精製水
  • 実験例
    図1 検出実験例
    1.デルマタン硫酸(2 μg/μL)、2.ムチン ブタ胃由来(10 μg/μL)、3.ムチン ウシ顎下腺由来(5 μg/μL)、4.ヒアルロン酸(0.25 μg/μL)。アプライ量は各1 μL。
    O結合型糖鎖の分析プロトコールはこちら
     
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    コード 品名 容量 保存温度 価格
    SMME-02 膜電気泳動槽セット 電気泳動槽 1台 室温 ¥25,000
    接続ケーブル 1本
    アタッチメント(上・下) 1セット
     参考文献
    1. Supported molecular matrix electrophoresis: a new tool forcharacterization of glycoproteins. Matsuno YK, Saito T, Gotoh M, Narimatsu H, Kameyama A. Anal Chem. 2009 May 15;81(10):3816-23. doi: 10.1021/ac900157c. [PMID: 19368346]
    2. Improved method for immunostaining of mucin separated by supported molecular matrix electrophoresis by optimizing the matrix composition and fixation procedure. Matsuno YK, Dong W, Yokoyama S, Yonezawa S, Saito T, Gotoh M, Narimatsu H, Kameyama A. Electrophoresis. 2011 Jul;32(14):1829-36. doi: 10.1002/elps.201000608. [PMID: 21710557]
    3. A procedure for Alcian blue staining of mucins on polyvinylidene difluoride membranes. Dong W, Matsuno YK, Kameyama A. Anal Chem. 2012 Oct 16;84(20):8461-6. doi: 10.1021/ac301678z. [PMID: 22950532]
    4. Identification of mucins by using a method involving a combination of on-membrane chemical deglycosylation and immunostaining. Matsuno YK, Dong W, Yokoyama S, Yonezawa S, Narimatsu H, Kameyama A. J Immunol Methods. 2013 Aug 30;394(1-2):125-30. doi:10.1016/j.jim.2013.06.002. [PMID: 23770070]
     
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