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グルコース細胞内取込量測定キット(広範囲、蛍光法)
Glucose Cellular Uptake Measurement Kit (Broad Range, Fluorometric)
本キットでは、グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ (G6PDH) による酵素反応によって 2DG6P 量に比例して NADPH を産生し、さらに NADPH の酸化に伴って蛍光基質から生じる蛍光物質の蛍光強度を測定します。
背景
インスリンは血糖を下げるホルモンで、その作用は脂肪細胞や骨格筋などインスリン感受性臓器を中心に糖輸送活性を促進し、細胞外から細胞内へ糖を取り込ませることが知られています。 糖取込み量を測定するには、一般的に 3H などで放射性ラベルした 3-O-メチル-D-グルコースや 2-デオキシグルコース(2DG) を用いる方法でおこなっています。この方法では放射性同位体を使用するためRI管理区域内のみしか使用することができず、使用する上で厳しい制限があるため通常の実験室レベルでは使用することができません。 本キットは、安全性や規制の問題がない non-RI 法によって細胞内に取り込まれた糖取込み量を簡便に測定できるキットです。細胞内に取り込まれた 2DG は、ヘキソキナーゼによって 2- デオキシグルコース-6-リン酸(2DG6P)にリン酸化されますが、次の酵素反応に進まずに細胞内に留まります。
高感度型の商品はこちらになります。

図1 キットの測定原理

グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ (G6PDH) による酵素反応によって 2DG6P 量に比例して NADPH を産生し、さらに NADPH の酸化に伴って蛍光基質から生じる蛍光物質の蛍光強度を測定します。
コード 品名 容量 保存温度 キャンペーン価格
MBR-PMG-K01 グルコース細胞内取込量
測定キット(広範囲、蛍光法)
反応基質液 9mL × 3本 -20℃
¥88,400
¥70,400
2017.6.30まで
1mM 2DG6P 500 µL × 1 本
検体希釈原液 5mL × 1 本
蛍光基質液 120 µL × 1 本
酵素溶液 270 µL × 1 本
マニュアルはこちら
製品特性/用途
  • 簡便手順の簡略化:1ステップで測定可能。
  • 測定時間の短縮:3時間で結果が得られます。
  • 測定範囲:0-50μMの広範囲測定が可能。
  • 安全性:非放射性なので安全性が高い。
  • 製品特性/比較表
    製品名 グルコース細胞内取込量測定キット(広範囲、蛍光法) 2-デオキシグルコース(2DG)代謝速度測定キット
    測定方法 Non-RI 法 Non-RI 法
    操作時間 3 時間 5 ~ 7 時間(2 日間)
    検出方法 蛍光(Ex 540nm/Em 590nm) 発色(420nm)
    特徴 広範囲な測定範囲(0 ~ 50 μM) で迅速に測定できる
    ハイスループットアッセイにも対応可能な1 ステップ法
    高感度(0 ~ 5 μM) で定量できる測定キット
    実施例
        
    検量線の結果を図2、3T3-L1 細胞を方法例および下記の添加スケジュールに従っておこなった 3T3-L1 細胞を抽出し測定した結果を図3に示しています(※一測定例になります)。
     参考文献
    1. Yamamoto N, et al ,(2006). A nonradioisotope, enzymatic assay for 2-deoxyglucose uptake in L6 skeletal muscle cells cultured in a 96-well microplate. Anal. Biochem. 351: 139-145.


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