Primarycell division of Cosmo Bio Co Ltd. コスモ・バイオ株式会社プライマリーセル事業部
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コラーゲン定量キット【Collagen Quantitative kit】
コラーゲンは細胞外マトリックスの主成分であり、ヒト全タンパク質の約30%を占めます。最近の研究で、老化した皮膚においてコラーゲンの産生が低下していること、特に疾病においてコラーゲンの分解や蓄積が見られること、などが明らかになっています。本キットは、3,4-Dihydroxyphenylacetic acid (3,4-DHPAA) がN末端にグリシンを有するペプチドに選択的に結合し蛍光を発することを利用したコラーゲン定量キットです。
3,4-DHPAAを用いたN末端グリシン含有ペプチドの蛍光反応
図1  3,4-DHPAAを用いたN末端グリシン含有ペプチドの蛍光反応
コラーゲンは、Gly-X-Y (X,Yは主にプロリン、ヒドロキシプロリン) という3アミノ酸残基の繰り返し配列を持ちます。コラーゲンを微生物由来コラゲナーゼで分解すると、N末端にNグリシンを有するペプチドフラグメントを大量に生成します。これを、3,4-DHPAAによって選択的に蛍光体に変換し、蛍光強度を測定するだけでコラーゲンの定量が可能となります。
コード 品名 容量 価格
COL-001
コラーゲン定量キット
酵素 (コラゲナーゼ) 原液 200 µL × 1 本
コラーゲン標準液 (500 µg/mL) 300 µL × 1 本
緩衝液 A 30 mL × 1 本
発蛍光試液 (3,4-DHPAA液) 500 µL × 1 本
緩衝液 B 15 mL × 1 本
NalO4溶液 5 mL × 1 本
¥30,000
マニュアルはこちら
製品特性/用途
  • 細胞層 (cell layer) および食品中、化粧品中のコラーゲンを迅速に測定することが可能
  • 既存のヒドロキシプロリンを測定する方法に比べ、塩酸加水分解の必要がなく、少量のサンプルで安全で
      簡単な手順で測定することが可能
  • 細胞研究および食品・化粧品製造工程中の品質管理や商品開発に最適
  • 実施例

    図2. コラーゲン定量検量線

    図3. 食品および化粧品中のコラーゲン含量

    図4. ウサギ軟骨細胞層中のコラーゲン量

    図5. 細胞層中のコラーゲン含量
     参考文献
    1. Selective and sensitive determination of peptides using 3, 4-dihydroxyphenylacetic acid as a fluorogenic reagent. Hasina Yasmin, Takayuki Shibata, Mohammed Shafikur Rahman, Tsutomu Kabashima, Masaaki Kai, Analytica Chimica Acta, 721 (2012) 162-166

    2. Amplified and selective assay of collagens by enzymatic and fluorescent reactions. Hasina Yasmin, Tsutomu Kabashima, Mohammed Shafikur Rahman, Takayuki Shibata, Masaaki Kai, Scientific Reports (May 2014) | 4 : 4950 | DOI: 10.1038/srep04950
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    品名 特徴
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